粪肠球菌为革兰氏阳性,过氧化氢阴性球菌。其原属于链球菌属,因其与其他链球菌同源程度低,甚至不到9%,故将粪肠球菌与屎肠球菌从链球菌属中分离出来,将其归为肠球菌属。粪肠球菌是一种兼性厌氧型革兰氏阳性乳酸菌,菌体形态为球状或链状,直径大小,无荚膜,无芽孢,对环境适应力和抵抗力强,可耐受四环素、卡那霉素、庆大霉素等多种抗生素,生长条件要求不严格。它可利用精氨酸为能源,发酵山梨醇,不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。
鉴别要点
1.本菌特征
革兰阳性球菌,触酶试验阴性,在6.5%NaCl中生长,胆汁七叶苷试验阳性,45℃中生长。
2.与链球菌属和乳球菌属的鉴别
肠球菌属能在pH9.6的肉汤和45℃环境中生长,胆汁七叶苷和盐耐受试验阳性,而链球菌属和乳球菌属则相反。
3.与屎肠球菌、鸟肠球菌的鉴别
粪肠球菌不分解L-阿拉伯糖,分解山梨觅醇。屎肠球菌能分解Ⅰ-阿拉伯糖,不分解山梨醇。鸟肠球菌分解L-阿拉伯糖、山梨醇。
4.与铅黄肠球菌、鹑鸡肠球菌的鉴别
粪肠球菌不分解鼠李糖,亚碲酸盐试定验阳性,铅黄肠球菌、鹑鸡肠球菌则相反。铅黄肠球菌与鹑鸡肠球菌的区别,铅黄肠球菌产黄色素鹑鸡肠球菌则不产。
关于粪肠球菌,北京清析技术研究院可提供生长曲线测定,毒力基因测定,生物膜总蛋白含量测定,PCR定量测定,分离鉴定测定等检测项目。同时,北京清析技术研究院可对猪源粪肠球菌,孵化死胚粪肠球菌,出壳雏鸡病原菌,动物源性粪肠球菌,饲料粪肠球菌,酵素粪肠球菌等进行检测。
检验方法
a.多管法
用适当的稀释液接种一套叠氮化钠葡萄糖肉汤管。接种量为1mL或以下的,使用10mL单料管;接种量为10mL,使用10mL双料管。35℃培养24-48h,并检查记录各管的混浊情况。用接种环将浑浊管中的培养物划线于PSE平板上,倒置平板于36℃培养24h。平板上出现的带棕色环的黑色菌落,确证为粪链球菌。根据接种的样品量和确证为是粪链球菌的管数,查MPN表,报告每克样品中的粪链球菌MPN值。
b.平板计数法
取1mL适当稀释液加入培养皿内,倾入12-15mL的KF或PSE培养基,转动平板充分混合。凝固后置36℃培养,KF平板培养48h,PSE平板培养24h。粪链球菌在KF平板上形成暗红色至粉红色菌落,边缘整齐,琼脂表面下菌落呈椭圆或晶体状;在PSE平板上形成带棕色环的棕黑色菌落。选择有30-300个菌落的平板进行记数。按粪链球菌数/g(mL)报告结果。
检测标准
1、DB41/T 1903-2019 饲料添加剂 粪肠球菌
2、DB13/T 5573-2022 鸡粪肠球菌病综合诊断技术规程
3、T/SHAAV 006-2021 微生物饲料添加剂中粪肠球菌的测定
4、DB21/T 3061-2018 饲用微生物制剂中粪肠球菌的检测方法