粪肠球菌检测鉴定实验室，第三方CMA检测中心

粪肠球菌为革兰氏阳性，过氧化氢阴性球菌。其原属于链球菌属，因其与其他链球菌同源程度低，甚至不到9%，故将粪肠球菌与屎肠球菌从链球菌属中分离出来，将其归为肠球菌属。粪肠球菌是一种兼性厌氧型革兰氏阳性乳酸菌，菌体形态为球状或链状，直径大小，无荚膜，无芽孢，对环境适应力和抵抗力强，可耐受四环素、卡那霉素、庆大霉素等多种抗生素，生长条件要求不严格。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。

鉴别要点

1.本菌特征

革兰阳性球菌，触酶试验阴性，在6.5%NaCl中生长，胆汁七叶苷试验阳性，45℃中生长。

2.与链球菌属和乳球菌属的鉴别

肠球菌属能在pH9.6的肉汤和45℃环境中生长，胆汁七叶苷和盐耐受试验阳性，而链球菌属和乳球菌属则相反。

3.与屎肠球菌、鸟肠球菌的鉴别

粪肠球菌不分解L-阿拉伯糖，分解山梨觅醇。屎肠球菌能分解Ⅰ-阿拉伯糖，不分解山梨醇。鸟肠球菌分解L-阿拉伯糖、山梨醇。

4.与铅黄肠球菌、鹑鸡肠球菌的鉴别

粪肠球菌不分解鼠李糖，亚碲酸盐试定验阳性，铅黄肠球菌、鹑鸡肠球菌则相反。铅黄肠球菌与鹑鸡肠球菌的区别，铅黄肠球菌产黄色素鹑鸡肠球菌则不产。

关于粪肠球菌，北京清析技术研究院可提供生长曲线测定，毒力基因测定，生物膜总蛋白含量测定，PCR定量测定，分离鉴定测定等检测项目。同时，北京清析技术研究院可对猪源粪肠球菌，孵化死胚粪肠球菌，出壳雏鸡病原菌，动物源性粪肠球菌，饲料粪肠球菌，酵素粪肠球菌等进行检测。

检验方法

a.多管法

用适当的稀释液接种一套叠氮化钠葡萄糖肉汤管。接种量为1mL或以下的，使用10mL单料管；接种量为10mL，使用10mL双料管。35℃培养24-48h，并检查记录各管的混浊情况。用接种环将浑浊管中的培养物划线于PSE平板上，倒置平板于36℃培养24h。平板上出现的带棕色环的黑色菌落，确证为粪链球菌。根据接种的样品量和确证为是粪链球菌的管数，查MPN表，报告每克样品中的粪链球菌MPN值。

b.平板计数法

取1mL适当稀释液加入培养皿内，倾入12-15mL的KF或PSE培养基，转动平板充分混合。凝固后置36℃培养，KF平板培养48h，PSE平板培养24h。粪链球菌在KF平板上形成暗红色至粉红色菌落，边缘整齐，琼脂表面下菌落呈椭圆或晶体状；在PSE平板上形成带棕色环的棕黑色菌落。选择有30-300个菌落的平板进行记数。按粪链球菌数/g(mL)报告结果。

检测标准

1、DB41/T 1903-2019 饲料添加剂 粪肠球菌

2、DB13/T 5573-2022 鸡粪肠球菌病综合诊断技术规程

3、T/SHAAV 006-2021 微生物饲料添加剂中粪肠球菌的测定

4、DB21/T 3061-2018 饲用微生物制剂中粪肠球菌的检测方法