植物遗传转化实验第三方检测机构

植物遗传转化是应用重组DNA技术、细胞组织培养 技术或种质系统转化技术，有目的地将外源基因或DNA片段插入到受体植物基因组中并通过减数分裂获得新植株的技术。

关于植物遗传转化，北京清析技术研究院可提供基因整合率、外源基因表达水平、抗逆性评估、生长发育特性、产量性状、品质指标、抗病虫害性能、环境交互作用、遗传稳定性、转基因植株生态学效应、代谢产物分析、基因组学分析、蛋白质组学分析、细胞学特征、形态学特征等检测项目。同时，北京清析技术研究院可对水稻、小麦、玉米、大豆、番茄、马铃薯、烟草、棉花、油菜、甘蔗等进行植物遗传转化检测。

实验流程

引物设计：设计带有载体的同源序列的引物，根据需求利用pcr扩增基因全长或CDS

质粒提取及载体酶切：将需要构建的空载体，摇菌提取质粒，进行酶切

跑胶、回收：将酶切产物及pcr产物进行琼脂糖凝胶电泳，对目的条带切胶回收

载体构建：利用同源重组方式进行连接载体，转化大肠杆菌感受态，涂在载体抗性的LB培养基上

挑菌鉴定，送测序：挑取单菌落，摇菌，进行菌液pcr鉴定，条带大小正确送测序，比对测序结果

转化农杆菌：测序正确的菌液，摇菌，保菌提质粒，转化农杆菌

侵染：转化后涂板长出的农杆菌，挑取单克隆进行菌液鉴定，鉴定后摇菌，侵染拟南芥

筛选阳性苗：侵染后的拟南芥收种子，在抗性板上筛选阳性苗

鉴定：利用载体和片段上引物PCR鉴和提取RNA反转录后进行QRT-PCR进行鉴定 

检测标准

1、T/CAB 0323-2024 农杆菌介导植物遗传转化通用技术规程

2、DB15/T 2044-2020 农杆菌介导甜菜遗传转化技术规程

3、T/GXAS 408-2022 农杆菌介导甘蔗遗传转化技术规程

4、T/SDAS 357-2022 农杆菌介导丹参遗传转化技术规程

5、T/SDAS 358-2022 农杆菌介导金银花遗传转化技术规程

6、DB15/T 2188-2021 农杆菌介导油菜黑胫病菌（Leptosphaeria biglobosa）遗传转化技术规程