蛋白酶活性测定可用于检查体内蛋白酶的含量,对于诊断一些疾病具有重要意义。蛋白酶是一种具有催化功能的蛋白,由胃肠道黏膜合成,主要分布于血液、胃肠道、胎盘等器官中,其中在肾脏中含量较高。临床上测定蛋白酶活性,主要使用酶联免疫吸附法、免疫荧光法、比浊法等。
关于蛋白酶活性,北京清析技术研究院可提供蛋白酶活性检测等检测项目。同时,北京清析技术研究院可对丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、内肽酶等进行蛋白酶活性检测。
检测方法
蛋白酶活性的测定方法有多种,包括但不限于以下几种:
1、福林-酚试剂法
此方法涉及蛋白酶从变性的酪蛋白中分解出可溶于三氯乙酸(TCA)的氨基酸,如酪氨酸和色氨酸,这些氨基酸与福林试剂反应生成蓝色复合物,通过分光光度计测定其吸光度,从而评估酶活性。
2、Anson测定法
在此方法中,首先用尿素使血红蛋白失活,然后测量消化产物。实验温度取决于酶的专一性。这种方法可以用来测定酶的活性。
3、考马斯亮蓝法
此方法利用考马斯亮蓝与蛋白质结合的能力来测定蛋白质的浓度,从而评估酶活性。
4、DHT-酪蛋白法
此方法使用5-氨基四唑重氮盐将酪氨酸中的部分组氨酸和酪氨酸重氮化,得到黄色的重氮5-氨基四唑酪蛋白(DHT-酪蛋白)。在蛋白酶作用下,水解生成DHT-肽,通过比色法测定酶活性。
5、甲醛滴定法
在此方法中,蛋白酶催化蛋白质水解成氨基酸,然后用甲醛固定氨基酸的氨基,用0.1mol/L NaOH溶液滴定生成的氨基酸,从而测定其酶活。
这些方法各有优缺点,适用于不同的应用和研究领域。选择哪种方法取决于实验的具体要求、可用资源以及方法的灵敏度和准确性。
检测标准
1、T/NAIA 0279-2024 土壤中蛋白酶活性的测定
2、NY/T 4306-2023 木瓜、菠萝蛋白酶活性的测定 紫外分光光度法
3、DB41/T 1615-2018 食用菌纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、蛋白酶活性检测技术规程
4、GB/T 33410-2016 生化试剂中蛋白酶K活性检测方法
5、GOST 33427-2015 饲料. 大豆制品胰蛋白酶抑制剂活性的测定
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