端粒酶活性检测，电镜测试

端粒酶在细胞中负责端粒的延长的一种酶，是基本的核蛋白逆转录酶，可将端粒DNA加至真核细胞染色体末端，把DNA复制损失的端粒填补起来，使端粒修复延长，可以让端粒不会因细胞分裂而有所损耗，使得细胞分裂的次数增加。端粒在不同物种细胞中对于保持染色体稳定性和细胞活性有重要作用，端粒酶能延长缩短端粒（缩短的端粒其细胞复制能力受限），从而增强体外细胞的增殖能力。

端粒酶的功能特性

端粒（Telomere）是真核细胞染色体末端的特殊结构。人端粒是由6个碱基重复序列（TTAGGG）和结合蛋白组成。端粒有重要的生物学功能，可稳定染色体的功能，防止染色体DNA降解、末端融合，保护染色体结构基因DNA，调节正常细胞生长。

由于正常细胞线性DNA复制时5'末端消失，随着体细胞不断增殖，端粒逐渐缩短。当细胞端粒缩至一定程度，细胞停止分裂，处于静止状态。故有人称端粒为正常细胞的“分裂钟”（Mitosis clock），端粒长短和稳定性决定了细胞寿命，并与细胞衰老和癌变密切相关。

端粒酶的活性在真核细胞中可检测到，其功能是合成染色体末端的端粒，使因每次细胞分裂而逐渐缩短的端粒长度得以补偿，进而稳定端粒长度。主要特征是用它自身携带的RNA作模板，以dNTP为原料，通过逆转录催化合成后延长链5′端DNA片段或外加重复单位。端粒酶在细胞中的主要生物学功能，是通过其逆转录酶活性复制和延长端粒DNA来稳定染色体端粒DNA的长度。

关于端粒酶，北京清析技术研究院可提供活性检测、含量检测、电镜检测、端粒长度测定、端粒酶活性分析、端粒结构和组成分析、端粒保护蛋白相关分析、端粒损伤和修复研究等检测项目。同时，北京清析技术研究院可对细胞端粒酶、植物端粒酶、合成端粒酶、染色体端粒酶等进行检测。

端粒酶活性检测方法

1.端粒重复序列延伸法

端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法 (Telom—eric Repeat Amplification Protoc  01．TRAP)。首先合成一个18nt的TS做上游引物，端粒酶结合TS末端的 GTT并合成AGGGT]rAG，然后每经过一次转位合成一个GGTTAG的6碱基重复序列，端粒酶灭活后，加入一个24nt的CX做下游引物，经过多次变性-退火-延伸，扩增端粒酶延伸产物。1994年Kim创建了该方法，它与DNA聚合酶分析方 法相似，如：把核酸提取物、代表脊椎动物端粒重复序列的单链DNA前体 (T1’AGGG)4和放射标记的磷酸脱氧核糖一起孵育，然后通过放射自显影检测凝胶上新添加的DNA重复序列。此方法是较早建立的方法，它稳定性好。其缺点是，需要样本量大，敏感性差，检测时间长，不适合临床标本的大量检测，检测时需同位素量较大。

2.TRAP法

TRAP法及其改进（关键是我们有没有PCR扩增机、电泳自显影及图像分析） 其基本原理是利用CHAPS去污剂提取端 粒酶后，将反应体系中下游引物CX(5'-(CCATTA) 3CCCTAA-3’]用石蜡层与其他反应隔开，在石蜡层上利用端粒酶的逆转录酶活性在非端粒核酸．TS(5’．AACCGTCGAGCAGTT-3’)引物3’末端合成端粒重复序列，然后将反应产物进行PCR扩增，石蜡层在高温时溶化，CX(引物加入到反应体系中，反应体系中含有(a-32P)dGTP或 （a-32P）CTP。由于端粒酶每合成一个TTAGGG就需要RNA模板重新定位，因此，反应产物在聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示为相隔6bp的梯状条带，TRAP法由于利用PcR技术对端粒 酶合成的端粒DNA进行扩增，因此能从104个正常细胞中检出混杂在其中的一个肿瘤细胞，这大大提高了检测的敏感性、速度和效果。

以上就是关于端粒酶检测的介绍，北京清析技术研究院提供分析、检测、测试、鉴定、研发等技术服务，已获得CMA、CNAS等资质证书。总院位于北京，在上海、广州、深圳、合肥、南京、成都、武汉等地区设立27家分院，工程师一对一咨询，寄样或上门任您选择，为您提供便利的检测服务。