铁蛋白定量检测，铁蛋白cma检测报告

铁蛋白是一种广泛存在的储铁蛋白，具有纳米尺寸的水合氧化铁内核和笼形结构的蛋白质外壳。铁蛋白是含20%铁的蛋白质。通常，存在于几乎所有身体组织尤其是肝细胞和网状内皮细胞内，作为铁储备。微量的血清铁蛋白反映了正常的铁储备。检测血清铁蛋白是缺铁性贫血诊断的重要依据。

鉴定方法

1、电镜鉴定

将铁蛋白水溶液滴在有Formvar膜的铜网上用3%磷钨酸染色3min自然干燥后电镜下观察可见含4个电子致密区球型蛋白分子，外被蛋白外壳直径12nm左右，内核7.5nm。

2、抗体和铁蛋白的结合

戊二醛作为偶联剂效果较好，对抗体活性影响小。可分为一步法和二步法。 

戊二醛一步法：在0.9mL的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH值7.0）中溶解15mg铁蛋白和3mg抗体，加入0.1mL戊二醛，在37℃中放置24h，加入0.01mol/L赖氨酸中止反应，反应物加入0.02%NaN3防腐。

戊二醛二步法：在每毫升0.1mol/L磷酸缓冲液（pH值7.0）中溶解50~80mg铁蛋白，加入戊二醛使其终浓度0.05%~0.15%，在37℃中放置2h后，过G-25柱，去除戊二醛，收集洗脱峰，按抗体，铁蛋白1:5的比例，在37℃反应12h，加入0.01mol/L赖氨酸中止反应，反应物加入0.02%NaN3。

3、铁蛋白标记抗体的纯化

铁蛋白标记抗体后的混合液中含一些未标记的抗体蛋白等，应尽量去除。纯化方法：将标记的抗体复合物，在4℃的条件下加入1:3体积的饱和硫酸铵饱和度为25%，4000rpm离心15min，去上清将棕黄色标记的铁蛋白沉淀溶于少量0.1mol/L磷酸缓冲（pH值为7.2），过G-25柱除盐。

4、铁蛋白免疫电镜标记流程

(1)电镜包埋后标记样品取材、固定、包埋和超薄切片同包埋后免疫电镜操作流程。铁蛋白标记的抗体分子量较大，较适合于细胞表面抗原的定位研究。

(2)电镜包埋前铁蛋白标记细胞内抗原标记需对组织进行适当处理，以增强其通透性。多用包埋前间接染色法。孵育均在湿盒内进行。

操作程序如下：①将组织标本制成10~15m厚片。

②切片漂洗后，1%BSA孵育，室温30min。

③特异性抗体（第 一抗体）中室温60min或4℃孵育过夜。

④PB充分漂洗3次，每次5min。

⑤铁蛋白标记的第二抗体孵育，室温30min。

⑥漂洗同上，再经戊二醛固定1h。漂洗后，1%锇 酸后固定2h。其他步骤同常规电镜。

检测标准

1、YY/T 1456-2016 铁蛋白定量检测试剂(盒)

2、T/CIFST 006-2021 食品中乳铁蛋白的测定 酶联免疫吸附法

3、GB 1903.17-2016 食品安全国家标准 食品营养强化剂 乳铁蛋白

4、T/TDSTIA 006-2019 奶及奶制品中乳铁蛋白的测定 液相色谱法

5、GB 5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定

6、NY/T 4439-2023 奶及奶制品中乳铁蛋白的测定 高效液相色谱法

7、WS/T 404.9-2018 临床常用生化检验项目参考区间 第9部分：血清C-反应蛋白、前白蛋白、转铁蛋白、β2-微球蛋白

8、GOST 33600-2015 乳和乳制品. 采用高效液相色谱法测定乳铁蛋白的方法

9、T/CCAA 70-2023 牛乳基婴儿配方奶粉中乳铁蛋白含量的测定液相色谱-串联质谱法

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