丙酮酸激酶活性检测，PK酶联免疫吸附试验

丙酮酸激酶（PK），别名丙酮酸磷转称酶、磷酸丙酮酸激酶，其分子质量为：228kDa。在糖酵解系统里，它是催化形成第二个ATP反应的酶。能以磷酸烯醇（phosphoenolpyruv- ate）丙酮酸和ADP生成丙酮酸和ATP·ΔGo1=-7．5kcal。除需要二价金属离子外（Mg2+和Mn2+）外，还需要一价金属离子（K+．Rb+，Cs+），在生理上起作用的大概是K+。分子量约25万。是催化ADP为ATP的形成，结果是形成丙酮酸的终产物。

关于丙酮酸激酶，北京清析技术研究院可提供酶活性检测，定量检测，酵解检测，酶联免疫吸附试验，定性检测，微生物检测，总活性比色法定量检测等检测项目。同时，北京清析技术研究院可对血液丙酮酸激酶，粪便丙酮酸激酶，生物组织丙酮酸激酶，磷酸烯醇丙酮酸激酶，外泌体丙酮酸激酶等进行检测。

活性测定——偶联法

即此酶催化生成的丙酮酸在乳酸脱氢酶的作用下进一步转化成乳酸，同时将NADH氧化成NAD+。检测340 nm处光吸收的变化，即能推知丙酮酸激酶的催化活性。

1.仪器设备

高速冷冻离心机、恒温水浴、紫外分光光度计等。

2.操作方法

1）粗酶样品的制备

植物材料按1：2～1：4的比例（w/v）加提取缓冲液（含50mmol/L Tris-HCl，pH7.5；10%甘油，15mmol/L巯基乙醇，1mmol/LEDTA，5mmol/LMgCl2），在研钵中研匀，20000×g离心10 min，取上清液（1~2ml），在已用同样缓冲液平衡的Sephadex G-25柱（1.6 cm×10 cm）上层析脱盐，收集样品供分析。以上操作在低温（约5℃）下快速进行。

2）活性测定

测定系统的组成：25mmol/L Bis-tris-propane或25mmol/L Mes-HCl，pH6.5;2 mmol/LPEP,1 mmol/L ADP,20mmol/LKCl,10mmol/LMgCl2,0.15mmol/L NADH，1 mmol/L DTT，5% PEG（8000），2 U/ml兔肌乳酸脱氢酶（rabbit muscle lactate de-hydrogenase，LDH）。加酶样启动反应，总体积1ml。30℃反应，检测340 nm光吸收值降低。

检测周期

到样后7-10个工作日（可加急），根据样品及其检测项目/方法会有所变动，具体需咨询工程师。

检测流程

1、沟通需求（在线或电话咨询）；

2、寄样（邮寄样品支持上门取样)；

3、报价（根据检测的复杂程度进行报价）；

4、签约（签订合同和保密协议）；

5、完成检测（检测周期会根据样品及其检测项目/方法会有所变动，出具检测报告，售后服务）。

以上就是关于丙酮酸激酶检测的介绍，北京清析技术研究院提供分析、检测、测试、鉴定、研发等技术服务，已获得CMA、CNAS等资质证书。总院位于北京，在上海、广州、深圳、合肥、南京、成都、武汉等地区设立27家分院，工程师一对一咨询，寄样或上门任您选择，为您提供便利的检测服务。