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溶酶体酶活性检测,第三方溶酶体检测实验室
发布时间: 2024-04-16 18:09 更新时间: 2024-04-30 08:00

溶酶体是分解蛋白质、核酸、多糖等生物大分子的细胞器。溶酶体具单层膜,形状多种多样,是0.025~0.8微米的泡状结构,内含许多水解酶。溶酶体在细胞中的功能是分解从外界进入到细胞内的物质,也可消化细胞自身的局部细胞质或细胞器,当细胞衰老时,其溶酶体破裂,释放出水解酶,消化整个细胞而使其死亡。


溶酶体的酶的特点

(1)溶酶体表面高度糖基化,有助于保护自身不被酶水解。膜蛋白多为糖蛋白,溶酶体膜内表面带负电荷,有助于溶酶体中的酶保持游离状态。这对行使正常功能和防止细胞自身被消化有着重要意义;

(2)所有水解酶在pH值=5左右时活性佳,但其周围胞质中pH值=7.2。溶酶体膜内含有一种特殊的转运蛋白,可以利用ATP水解的能量将胞质中的H+(氢离子)泵入溶酶体,以维持其pH值=5;

(3)只有当被水解的物质进入溶酶体内时,溶酶体内的酶类才行使其分解作用。一旦溶酶体膜破损,水解酶逸出,将导致细胞自溶。


关于溶酶体,北京清析技术研究院可提供酶活性测定,相关蛋白测定,酸碱度测定,膜稳定性测定,脂肪酶测定,胆固醇测定,葡萄糖苷酶测定,膜完整性测定等检测项目。同时,北京清析技术研究院可对羊水培养细胞溶酶体,溶酶体膜糖蛋白,绒毛组织溶酶体,小鼠溶酶体,细胞溶酶体,植物细胞溶酶体,细菌溶酶体,溶酶体膜蛋白等进行溶酶体的检测。


检测方法

1、酶活性检测法 

酶活性检测法是衡量溶酶体功能的一种常用方法。该方法通过测定溶酶体内酶 的活性水平来评估其功能状态。常见的酶活性检测法包括酸性磷酸酶(ACP)活性 检测和酸性乙酰胆碱酯酶(AChE)活性检测等。 

2、蛋白质标记法 

蛋白质标记法是检测溶酶体的另一种常用方法。通过标记特定的蛋白质,如溶 酶体膜蛋白(LAMP1)等,可以直接观察和定量溶酶体的分布和形态。这种方法 常用于显微镜观察和细胞荧光染色。 


溶酶体酶活性测定方法

用于溶菌酶活性检测的方法较多,如琼脂板扩散法、比浊法、比色法、高效液相色谱法、琼脂糖 火箭电泳法等。其中,使用多、可信度相对较高的是比浊法,也是GBT 25879- 20105和国 家药典四中采用的方法。该法中使用溶壁微球菌悬浮液作为反应底物悬浮液,菌体颗粒和缓冲液组成固-液相分布体系。该法主要原理为:溶菌酶对菌体有溶解作用,菌体的解体使底物悬浮液的吸光度降低;但是,众多其他因素也会对底物悬浮液的吸光度值产生影响,如菌体的重力作用、自身解体现象、微球菌生长状态、测定活性时的预热时间、预热温度、反应时间等,从而影响溶菌酶活性的测定结果。


检测标准

1、T/SHAAV 022-2024 饲料添加剂 蛋清溶菌酶寡聚体

2、GB/T 36390-2018 工具酶 溶菌酶

3、QB/T 5030-2017 溶菌酶

4、WS/T 647-2019 溶葡萄球菌酶和溶菌酶消毒剂卫生要求

5、T/ZZB 0261-2017 饲料添加剂 溶菌酶

6、GB/T 30990-2014 溶菌酶活性检测方法

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