单分子免疫检测，单分子免疫分析

SMC™单分子免疫检测技术(Single Molecule Counting)是蛋白生物标志物检测领域的突破性新技术。利用激光聚焦于爱里斑中单个荧光标记分子，人类实现了在单分子水平对蛋白进行计量，并造就了1000倍于ELISA技术的超高检测灵敏度。SMC™单分子免疫检测技术具备宽至4个log的大动态检测范围， 可根据靶标丰度和成本灵活选择实验方案，便于自行开发检测试剂盒，接近于ELISA的易用性等特征。该技术已被广泛应用于多种疾病生物标志物的检测，包括心血管疾病，炎症，糖尿病，神经疾病，癌症等等，使研究者对生物标志物的应用和认识达到了全新的高度。更重要的是，针对创新性生物标志物的研究，Erenna免疫检测系统提供工具，帮助研究者便捷地自行开发和优化检测试剂盒，实现全新生物标志物的高效率检测。

单分子免疫检测的主要特点

1.突破性的超高检测灵敏度SMC™单分子免疫检测技术与酶联免疫吸附剂测定（ELISA）操作一样简便，但灵敏度可达到ELISA的约1000倍，成功实现浓度在fmol级别蛋白靶标的检测。高能量的激光通过爱里斑聚焦于溶液里的单个荧光素标记二抗分子，产生的荧光闪烁进行数字化计量，从而实现“单分子检测”。灵敏度远高于传统ELISA，Multiplex等技术的全新单分子检测方法使种类远多于已知蛋白的未知蛋白靶标检测成为现实，将带来全新的基础和转化医学新发现。

2.宽至4个log的大动态检测范围以Erenna为例，动态检测范围超过4个log，有利于蛋白靶标表达量存在巨大差异的样本进行同时检测。

3.根据靶标丰度灵活选择实验方案既可使用磁珠又可使用普通96孔板作为抗体包被介质。在灵敏度和成本方面取得了巧妙平衡。

4.便于自行开发检测试剂盒开创性的新技术往往会应用于开创性的工作。如果检测的是全新的标志物，商业化的整套试剂盒开发工具，可在极短时间内开发新检测试剂盒。

关于单分子免疫，北京清析技术研究院可提供癌症标志物检测、 病毒检测、 细菌检测、 抗体检测、 DNA检测、 RNA检测、 蛋白质检测、 血液疾病检测、 免疫球蛋白检测、 药物检测、 残留物检测、 遗传疾病检测、 基因突变检测、 肿瘤标志物检测、 微生物检测、 进食过敏原检测、 环境污染物检测等检测项目。同时，北京清析技术研究院可对血液样本、尿液样本、唾液样本、脑脊液样本、细胞培养物、组织切片、体液样本(如乳汁、胸腔积液)、药物样品、食品样品、环境样品等进行单分子免疫的检测。

单分子免疫检测方法

1、单分子荧光检测

该方法利用荧光标记的抗体或其他检测分子与目标分子结合后产生荧光信号的变化。通过使用高分辨率荧光显微镜观察单个分子的荧光强度、强度衰减特性和位置信息等，可以实现单分子级别的检测。

2、单分子电化学检测

该方法利用电化学传感器检测与目标分子结合引起的电流变化。常用的电化学传感器包括阻抗谱和注射电流等，通过监测电流信号的变化可以实现单分子水平的检测。

3、单分子质谱检测

该方法利用质谱技术检测单个分子的质量和结构信息。通过将目标分子与荧光素或其他增强信号的分子结合，然后使用质谱仪进行检测，可以实现对单个分子的定性和定量分析。

4、单分子振动检测

该方法利用纳米尺度的力学探针或微流体系统检测与目标分子结合引起的振动信号变化。通过监测探针的振幅、频率或相位等参数的变化，可以实现单分子级别的检测。

单分子免疫检测的关键点

实现单分子免疫检测是分析化学检测的一个目标，但是由于单分子检测对象的浓度极低，因此在实际操作中会出现很多的干扰因素，影响检测结果。如何提高检测的效率，尽可能的降低检测带来的误差，也成为这一领域的研究目标。正如Keller所说：“单分子检测能力的高低与其说是检测灵敏度的提高，不如说是背景噪音的降低”。其技术关键点如下所示：

1.杂散光/噪声背景的消除

单分子检测的过程中，我们常常需要克服一个关键难点：杂散光背景比荧光信号大很多。因此为了更好的实现单个分子的检测，必须降低杂散光的干扰。杂散光的主要来源：瑞利散射光、光学器件散射光、样品的自发荧光、检测器暗电流、溶液的拉曼散射。杂散光/噪声对检测的影响极为严重。

为了降低噪声，要选择低噪声、高效的光学材料元件和检测器，对溶液进行过滤，对溶液、载体进行预漂白；此外，还可以通过选择合适的激发与发射波长以降低背景噪声。

而当检测到“光子爆发”时，利用数字滤波技术可以根据光子爆发的形状来判断它的来源，从而有效地对染料分子的光子爆发进行识别，进一步滤除杂散光背景，提高信噪比。

2.提高光子检测效率

检测器是单分子荧光探测的关键部分，由于单个分子的荧光很弱，这就要求荧光检测器具有较高的量子效率和很低的暗计数。目前常用的超敏检测器是ICCD和APD，希望光子检测效率达到0.1％以上。

目前，提高光子检测效率可采取的主要措施有：①提高光子收集效率，减少传输过程中的损失。在整个光子传输的过程中，现在主要运用的是光纤导线传输，有效的提高收集量；②使用单光子检测器。

3.提高信号强度

提高信号强度可以选择的策略有：①选择体积大的荧光探针载体（如纳米微球），加大焚光探针数量；②选择多重标记的荧光探针载体，也就是在一个分子上同时标记多个荧光分子；③挑选荧光强度高的荧光探针；④可以通过纳米材料（如纳米金、纳米银、量子点等）的辅佐，增加荧光强度。

以上就是关于单分子免疫检测的介绍，北京清析技术研究院提供分析、检测、测试、鉴定、研发等技术服务，已获得CMA、CNAS等资质证书。总院位于北京，在上海、广州、深圳、合肥、南京、成都、武汉等地区设立27家分院，工程师一对一咨询，寄样或上门任您选择，为您提供便利的检测服务。