生物活性测试机构，生物活性检测实验室

	更新时间 2024-11-10 08:00:00 价格请来电询价联系电话 19355561601 联系手机 19355561601 联系人肖工立即询价

详细介绍

生物活性，在材料领域里主要指能在材料与生物组织界面上诱发特殊生物、化学反应的特性，这种反应导致材料和生物组织间形成化学键合。在生物矿化过程中，主要指生物材料与活体骨产生化学键合的能力，是衡量生物材料的一个重要指标，可通过材料表面在人体模拟体液（simulated body fluid-SBF）中形成磷灰石的能力能够反应材料在体内的生物活性，此评价材料生物活性方法的应用可以减少实验所需动物数量，同时增加动物实验的可持续时间。

检测方法

1、四唑盐（MTT）比色法

MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。此法的原理是：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物，并沉积在细胞中，而细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的蓝紫色结晶物，用酶联免疫检测，以在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反应活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。

用此法测细胞活力，为保证结果的准确性，在试验前测定每种细胞的贴比率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，再确定每孔细胞接种数和培养时间，以保证培养终止时不会过满。另外，实验时设空白对照，比色时，以空白孔调零。

2、细胞蛋白质含量测定法（考马斯亮蓝测定法）：

也称考马斯蓝染色法，基本原理为考马斯亮蓝在酸性溶液与蛋白质结合，在595nm波长处呈吸收，其OD值与蛋白质含量成正比。此种方法主要用于测定受体及细胞外代谢物的特异性活性，是目前灵敏度高的蛋白质测定法。

考马斯亮蓝G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的吸收峰（lmax）的位置，由465 nm变为 595 nm，溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。通过测定595 nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸特别是精氨酸和芳香族氨基酸残基相结合。

3、细胞蛋白质合成测定法（3H-亮氨酸掺入法）

基本原理为：细胞在合成蛋白质时需要摄取外源性氨基酸，用同位素标记氨基酸如3H-亮氨酸可以掺入细胞蛋白合成代谢中，通过测定细胞的放射性强度，可了解细胞蛋白质合成代谢情况。

（1）取对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化，悬浮于含10%胎牛血清的RPMI培养基中，调整细胞密度107-109个/L，接种于24孔培养板，每孔1ml。

（2）将培养板置37℃、5%CO2培养箱中培养至细胞处于对数生长期时，每孔100ul预温37℃的3H-亮氨酸。

（3）继续培养4-24h。

（4）终止培养，取出培养板，小心吸取培养上清，用预冷的PBS洗涤，晾干。如果细胞松散，可先用甲醇固定10min。

（5）把培养板放在冰盖上，每孔加1ml 10%三氯醋酸（TCA），在4℃放置10min，吸取上清。

（6）甲醇洗涤、晾干。