亲和层析分析，免疫亲和层析

亲和层析是利用生物分子间专一的亲和力而进行分离的一种层析技术。亲和层析是分离纯化蛋白质、酶等生物大分子特异而有效的层析技术，分离过程简单、快速，具有很高的分辨率，在生物分离中有广泛的应用。同时它也可以用于某些生物大分子结构和功能的研究。

亲和层析的原理是利用生物分子之间特异性的相互作用，即亲和力。亲和层析的过程包括将这种相互作用的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，这个固定的分子称为配体，而另一个分子则通过样品溶液进入层析柱，并与配体发生特异性结合。这样，待分离的生物分子就留在固定相上，而其他杂质则随流动相流出，通过适当的洗脱液可以将待分离的生物分子从配体上洗脱下来，从而达到纯化的目的。常用的配体有酶的底物类似物、抑制剂、抗原等，基质则有Sepharose-4B等。亲和层析因其高分辨率和选择性而被广泛应用于生物大分子的分离和纯化。

免疫亲和层析示例

抗原和抗体利用抗原、抗体之间高特异的亲和力而进行分离的方法又称为免疫亲和层析。例如将抗原结合于亲和层析基质上，就可以从血清中分离其对应的抗体。在蛋白质工程菌发酵液中所需蛋白质的浓度通常较低，用离子交换、凝胶过滤等方法都难于进行分离，而亲和层析则是一种非常有效的方法。将所需蛋白质作为抗原，经动物免疫后制备抗体，将抗体与适当基质偶联形成亲和吸附剂，就可以对发酵液中的所需蛋白质进行分离纯化。抗原、抗体间亲和力一般比较强，其解离常数为108－10?12M，所以洗脱时是比较困难的，通常需要较强烈的洗脱条件。可以采取适当的方法如改变抗原、抗体种类或使用类似物等来降低二者的亲和力，以便于洗脱。

另外金黄色葡萄球菌蛋白A（ProteinA）能够与免疫球蛋白G（IgG）结合，可以用于分离各种IgG。

亲和层析的步骤

1、选择适当的亲和配体

在进行亲和层析之前，首先需要选择适合目标分子的亲和配体。亲和配体可以是化学合成的低分子化合物，也可以是蛋白质或核酸等生物大分子。亲和配体的选择应基于目标分子的特异性识别能力，以及与亲和树脂的结合亲和力。

2、制备亲和树脂

亲和树脂是一种具有亲和配体的固体基质。制备亲和树脂的方法多种多样，常见的包括固相合成、共聚合和交联等。亲和树脂的选择应考虑到亲和配体与目标分子之间的亲和力、稳定性和可再生性等因素。

3、样品预处理

在进行亲和层析之前，需要对样品进行适当的预处理。这包括去除杂质、浓缩目标分子和调整样品的适宜pH值等。样品预处理的目的是提高亲和层析的效果，并减少非特异性结合和背景噪音。

4、装柱层析

装柱层析是亲和层析的核心步骤。首先，将亲和树脂装填到柱子中，并平衡柱子以达到稳定的流量和背景。然后，将经预处理的样品加载到柱子上，并进行洗脱和洗脱阶梯。洗脱阶梯的选择应基于亲和层析的目的和目标分子与亲和树脂之间的结合强度。

5、收集纯化的目标分子

通过洗脱阶梯，目标分子与亲和树脂之间的结合被解除，目标分子从柱子中洗脱出来。洗脱的目标分子可以通过分离技术（如离心、凝胶电泳等）进行进一步的纯化和检测。

6、再生亲和树脂

为了再次使用亲和树脂，需要对其进行再生。再生的方法取决于亲和树脂的特性和使用情况，常见的再生方法包括酸碱洗脱、盐洗脱和溶剂洗脱等。再生后的亲和树脂可以再次装填到柱子中，进行下一次的亲和层析。

分析标准

1、GB/T 38172-2019 蛋白A亲和层析介质

2、T/SZBX 017-2021 蛋白A亲和层析介质

3、GB/T 23501-2009 食品中T-2毒素的测定.免疫亲和层析净化高效液相色谱法

4、GB/T 23504-2009 食品中玉米赤霉烯酮的测定.免疫亲和层析净化高效液相色谱法

5、GB/T 23502-2009 食品中赭曲霉毒素A的测定.免疫亲和层析净化高效液相色谱法

6、DB34/T 813-2008 饲料中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化荧光光度法

7、GOST ISO 14501-2016 牛奶和奶粉 黄曲霉毒素M1含量的测定 免疫亲和层析纯化和高效液相层析检测

8、GB/T 23503-2009 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定.免疫亲和层析净化高效液相色谱法

9、DB15/T 910-2015 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法

以上就是关于亲和层析的介绍，北京清析技术研究院提供分析、检测、测试、鉴定、研发等技术服务，已获得CMA、CNAS等资质证书。总院位于北京，在上海、广州、深圳、合肥、南京、成都、武汉等地区设立27家分院，工程师一对一咨询，寄样或上门任您选择，为您提供便利的检测服务。