荧光素酶是自然界中能够产生生物发光的酶的统称，其中有代表性的是一种学名为Photinus pyralis的萤火虫体内的荧光素酶。在相应化学反应中，荧光的产生是来自于萤光素的氧化，有些情况下反应体系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。没有荧光素酶的情况下，萤光素与氧气反应的速率非常慢，而钙离子的存在常常可以进一步加速反应（与肌肉收缩的情况相似）。

荧光素酶报告基因的应用原理

转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。

其原理简述如下：

（1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如pGL3-basic等。

（2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。

（3） 加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。

关于荧光素酶，北京清析技术研究院可提供酶活性检测，波长检测，定量检测，荧光素酶检测报告，底物溶液检测，载体检测，标记细胞检测，定量检测，分子量检测，方法学验证等检测项目。同时，北京清析技术研究院可对萤火虫荧光素酶，荧光素酶底物，双荧光素酶，植物荧光素酶，细菌荧光素酶，荧光素酶钾盐等进行检测。

检测步骤

荧光素酶检测方法是一种利用荧光素酶催化荧光素底物生成荧光信号的技术。荧光素酶是一种天然存在于某些生物体内的酶，能够将荧光素底物氧化为产生荧光的产物。荧光素酶检测方法通过检测荧光素底物转化为荧光产物的荧光信号来定量分析样品中的荧光素酶活性。

1）实验准备

1. 准备荧光素酶底物：根据实验需要选择合适的荧光素底物，常见的有荧光素、二甲基荧光素等。

2. 调配荧光素酶反应缓冲液：根据实验要求配制荧光素酶反应缓冲液，确保适宜的pH值和离子浓度。

3. 样品处理：根据实验目的，对待测样品进行处理，如提取靶标蛋白、纯化荧光素酶等。

2）检测流程

1. 预处理样品：将待测样品加入适量的荧光素酶反应缓冲液中，进行预处理，以提高荧光素酶的活性和稳定性。

2. 加入荧光素底物：将适量的荧光素底物加入反应液中，使荧光素酶与底物发生催化反应，生成荧光产物。

3. 反应体系优化：根据实验需求，优化反应体系的温度、反应时间等参数，以获得良好的荧光信号。

4. 荧光检测：使用荧光分析仪器对反应体系中的荧光信号进行检测，记录荧光强度或发射光谱。

5. 数据分析：根据荧光信号的强度或光谱特征，进行数据分析，如计算样品中荧光素酶的活性或浓度。

3）数据分析

荧光素酶检测方法的数据分析主要包括荧光强度计算、活性或浓度计算等。常用的数据分析方法有标准曲线法、内标法、比较阈值循环法等。根据实验设计和样品特点，选择合适的数据分析方法进行结果解读。

检测标准

1、T/SHRH 014-2018 化妆品 体外皮肤致敏试验-ARE-Nrf2 荧光素酶试验方法

2、GOST 34896-2022 化学产品对人体影响的测试方法 体外皮肤过敏 ARE-NRF2荧光素酶法

以上就是关于荧光素酶检测的介绍，北京清析技术研究院提供分析、检测、测试、鉴定、研发等技术服务，已获得CMA、CNAS等资质证书。总院位于北京，在上海、广州、深圳、合肥、南京、成都、武汉等地区设立27家分院，工程师一对一咨询，寄样或上门任您选择，为您提供便利的检测服务。